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產(chǎn)品型號:
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
訪問量:92
更新時間:2024-11-04
小鼠結(jié)腸平滑肌細胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
結(jié)腸組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X7177 |
細胞簡介:
小鼠結(jié)腸平滑肌分離自結(jié)腸組織;結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分,大部分固定于腹后壁,結(jié)腸的排列酷似英文字母“M",將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為:黏膜(上皮層、固有層、黏膜肌層),黏膜下層(疏松結(jié)締組織),肌層(內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑?。饽ぃɡw維膜或漿膜)。結(jié)腸平滑肌細胞主要分布于黏膜肌層和肌層的內(nèi)環(huán)形、外縱行平滑??;結(jié)腸運動少而緩慢,對刺激的反應(yīng)也較遲緩。結(jié)腸平滑肌在食物消化與吸收、腸道運動和物質(zhì)分泌、誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)以及細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等研究中起著重要的作用。結(jié)腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網(wǎng)狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。結(jié)腸平滑肌運動活性受到神經(jīng)遞質(zhì)、胃腸激素和藥物等因素的調(diào)節(jié)。隨著現(xiàn)代胃腸動力學研究的進展,對胃腸運動的研究已從器官、組織水平發(fā)展到細胞、分子水平,要求在胃腸道單個平滑肌細胞標本上來完成各種電生理、藥理和分子生物學等實驗。體外培養(yǎng)細胞,由于影響因素單一,是研究細胞功能以及相應(yīng)的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制的基礎(chǔ)。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠結(jié)腸平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的小鼠結(jié)腸平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
抑癌蛋白DKK3 英文名稱: Dikkopf 3 規(guī)格: 英文縮寫: DKK3
脫氫血栓素B2 英文名稱: Human 11 dehydro Thromboxane B211 規(guī)格: 英文縮寫: 11-DH-TXB2
2,3二0酸甘油酸 英文名稱: Human 2,3 Diphosphoglycerate 規(guī)格: 英文縮寫: 2,3-DPG
D二聚體 英文名稱: Human D. Dimer 規(guī)格: 英文縮寫: D.D
魚補體3(C3)試劑盒
Human aidiuretic hormone / vasopressin / arginine vasopressin (ADH/VP/AVP) ELISA Kit 人抗利尿激素/血管加壓素/精加壓素(ADH/VP/AVP)試劑盒
HumanVitaminA,VAELISAKit 人A(VA)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforADH/VP/AVP(Mouseaidiuretichormone/vasopressin/argininevasopressin)ELISAKit小鼠抗利尿激素/血管加壓素/精加壓素
血液乙酰酯酶活性熒光法定量試劑盒20次
Mousereducedglathione,GSHELISAKit小鼠還原型(GSH)試劑盒
BHLHE41單克隆抗體
19號染色體開放閱讀框71抗體
GLIPR1重組小鼠 GLIPR1 / RTVP1 蛋白 (His 標簽) Protein
基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)重組蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 10 (MMP10)
S100A4重組人 S100A4 蛋白 (His 標簽) Protein
CA3 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase III / CA3 蛋白 (His 標簽)
GFRA1 Protein Canine 重組狗 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白 (His 標簽)
基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP10)重組蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 10 (MMP10)
CA3 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase III / CA3 蛋白 (His 標簽)
GLIPR1重組小鼠 GLIPR1 / RTVP1 蛋白 (His 標簽) Protein
GFRA1 Protein Canine 重組狗 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白 (His 標簽)
S100A4重組人 S100A4 蛋白 (His 標簽) Protein
小鼠結(jié)腸平滑肌細胞大鼠高密度脂蛋白3(HDL3)試劑盒 ,英文名: HDL3 ELISA Kit
Rabbit esadiol (E2) ELISA Kit 兔子雌二醇(E2)試劑盒
C組輪狀病毒(HRV-C)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
CLIAKitforMHCELISAKit魚類主要組織相容性復(fù)合體
體液尿酸含量酶偶聯(lián)比色法定量試劑盒20次
ELISAKitCS牛檸檬酸合成酶
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行
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