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更新時間:2024-11-05
兔骨髓樹突狀細胞 (成熟DC細胞)
商品屬性:
組織來源 | 產品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
骨髓 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 圓形,樹突狀 | YS-01X8359 |
細胞簡介:
兔骨髓樹突狀分離自骨髓;骨髓是機體的造血組織,位于身體的許多骨骼內。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細菌、病毒等;某些淋巴細胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質間的網眼中,是一種海綿狀的組織,能產生血細胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細胞增多,相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細胞是由骨髓單核細胞誘導而成的;樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞,典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,細胞大而形態(tài)不規(guī)則,表面皺褶多,亦可見少量短刺狀突,胞內細胞器豐富并可見吞噬泡,具有較強的遷移能力,伴隨有部分未誘導成的單核細胞,貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經TNFα、LPS等誘導而成,多數呈懸浮生長, 細胞呈圓形,細胞體積進一步增大,表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導致自發(fā)分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志,主要通過形態(tài)學、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,進而激活T淋巴細胞,誘導免疫應答,處于啟動、調控、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié);未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產生免疫應答,不能激活T細胞的第二信號,可導致T細胞無能,從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低,一般在30%以下。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養(yǎng)1周時,應將細胞懸液經低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
實驗室分離的兔骨髓成熟DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的兔骨髓樹突狀(成熟DC細胞)經CD86免疫熒光鑒定、細胞形態(tài)等綜合鑒定,純度可達80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:半貼壁半懸浮
細胞形態(tài):圓形,樹突狀
傳代特性:屬于高度分化細胞;屬于不增殖細胞群
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔骨髓樹突狀 (成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數板計數。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。
公司正在出售的產品:
(Cytochrome C) 作用: ELISA 試劑盒 組裝/原裝
CXC 趨化因子受體 1(CXCR1) 作用: ELISA 試劑盒 組裝/原裝
CXCR3(CXCR-3) 作用: ELISA 試劑盒 組裝/原裝
人 CXCL-11(I-TAC) 作用: ELISA 試劑盒 組裝/原裝
鋅指蛋白774抗體
Mad2L1重組兔單克隆抗體
PTN重組小鼠 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白 Protein
催乳素誘導蛋白(PIP)重組蛋白 Recombinant Prolactin Induced Protein (PIP)
CD22重組人 Siglec-2 / CD22 蛋白 (aa 176-687, His 標簽) Protein
FCGR3B Protein Human 重組人 CD16b / FCGR3B 蛋白
KLRK1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 NKG2D / KLRK1 蛋白僀?僀
ACTH (Adrenorticotrophin hormons 0.1mgACTH (Adrenorticotrophin hormons)(1-39) 促腎上腺皮質激素(1-39)(抗原)
FCGR3B Protein Human 重組人 CD16b / FCGR3B 蛋白
KIRREL3重組小鼠 KIRREL3 / NEPH2 蛋白 (His 標簽) Protein
IL2RG Protein Rat 重組大鼠 IL2RG / CD132 蛋白
APOL1重組人 APOL1 / apolipoprotein L1 蛋白 (His 標簽) Protein
小鼠對基苯(PABA)ELISA 試劑盒
Human acidic fibroblast growth factor 1 (aFGF-1) ELISA Kit 人酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)試劑盒
Humanplatelet-associatedCompleme3,PAC3ELISAKit 人血小板相關補體3(PAC3)試劑盒分裝
HumanAquaporin4,AQP-4試劑盒人水通道蛋白4(AQP-4)試劑盒
植物異檸檬酸脫氫酶(isociatedehydrogenase;IDH)電泳分析試劑盒5次
Humahyroxine,T4ELISAKit人甲狀腺素(T4)試劑盒
兔骨髓樹突狀細胞 (成熟DC細胞)大鼠尾加壓素2受體(S2R)試劑盒 ,英文名: S2R ELISA Kit
Mouse fibroblast growth factor 1 (aFGF-1) ELISA Kit 小鼠酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)試劑盒
MouseIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit 小鼠白介素2受體(IL-2R)試劑盒分裝
CLIAKitforHSCCAg-2(umanSquamousCellCarcinomaAigen2)ELISAKit人鱗狀上皮細胞癌抗原2
細胞NLK激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitβ-EP大鼠β內啡肽
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