試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人心型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-FABP)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人心型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-FABP)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
?、酃艿准訕樱荒芗釉诠鼙谏?/div>
?、芗訕訒r不能產(chǎn)生氣泡
2、溫浴
①加標本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫度的水浴箱。
?、诟鱁LISA板不應(yīng)疊在一起。
③為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的金屬濕盒中。
④加入底物后,反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求。如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便不時觀察,待對照管顯色適當(dāng)時,即可終止酶反應(yīng)。
3、洗滌
?、傧礈煸贓LISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
?、谀康氖窍慈シ磻?yīng)液中沒有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4、讀板
?、訇幮詫φ疹伾珮O淺,在定性測定中一般可采用目視比色。
?、谌缬妹笜藘x測定結(jié)果,準確性決定于ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質(zhì)量和軟件的算法。